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根據(jù)基因序列設(shè)計合成sgRNA，針對Knockin插入點或點突變位置構(gòu)建含Knockin片段或點突變的同源序列，與Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵胞質(zhì)，Cas9核酸酶、sgRNA、基因組靶序列結(jié)合并切割雙鏈DNA，以含Knockin的同源序列為模版修復(fù)基因組DNA，最終獲得在目的DNA序列插入Knockin片段或點突變的Knockin小鼠。

CRISPR/Cas9靶向基因改造（敲除、敲入）技術(shù)是最新發(fā)展起來的一種強有力的基因組編輯工具。CRISPR技術(shù)的效率相較于TALEN技術(shù)要高得多，且可以一次性的對多個基因同時進行敲除和/或敲入?，F(xiàn)已廣泛用于各類動植物個體或細(xì)胞基因組的遺傳學(xué)改造。

威斯騰生物擁有SPF級動物動物房，配有IVC和EVC飼養(yǎng)設(shè)備，新推出小鼠代繁殖、動物保種、飼養(yǎng)與篩選等服務(wù)。

通過CRISPR /Cas9基因敲除技術(shù)，針對靶基因設(shè)計和構(gòu)建gRNA與Cas9表達質(zhì)粒，造成目的基因的功能區(qū)域被敲除，獲得全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達該基因的小鼠模型 。

條件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系統(tǒng)實現(xiàn)。首先把兩個LoxP位點插入到目的基因的一個或幾個重要外顯子的兩端，以制備出有兩個Loxp位點的floxed小鼠。floxed小鼠在與表達Cre重組酶小鼠雜交之前，該基因正常表達；當(dāng)floxed小鼠與組織特異性表達Cre酶的小鼠進行雜交后，可實現(xiàn)在特定的組織或細(xì)胞中敲除該基因，而在其它組織或細(xì)胞中該基因表達正常。