科研服務(wù) 時間：2020-07-17 16:47:00 瀏覽：59963次
技術(shù)原理：
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced
Short Palindromic
Repeats）最新出現(xiàn)的一種由RNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術(shù)。CRISPR是細菌和古細菌為應(yīng)對病毒和質(zhì)粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。在這一系統(tǒng)中，crRNA（CRISPR-derived
RNA）通過堿基配對與tracrRNA（trans-activating
RNA）結(jié)合形成雙鏈RNA，此tracrRNA/crRNA二元復(fù)合體指導(dǎo)Cas9蛋白在crRNA引導(dǎo)序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠛痛笫蠡蚪M特定基因位點進行精確編輯，
目前已經(jīng)成功應(yīng)用于大、小鼠基因KO/KI的模型制備。
技術(shù)特點：
（1）無物種限制
（2）靶向精確性更高
（3）可實現(xiàn)對靶基因多個位點同時敲除
（4）基因調(diào)控方式多種多樣
（5）修飾效率高，實驗周期短
通過CRISPR
/Cas9基因敲除技術(shù)，針對靶基因設(shè)計和構(gòu)建gRNA與Cas9表達質(zhì)粒，造成目的基因的功能區(qū)域被敲除，獲得全身所有的組織和細胞中都不表達該基因的小鼠模型
。
移碼突變鼠的建系原則與流程
1、通過針對靶基因設(shè)計、構(gòu)建相應(yīng)的gRNA質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)錄為RNA后，與Cas9 mRNA一起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代雜合子鼠；
2、F0代雜合子鼠與野生型鼠進行交配，獲得PCR和測序鑒定陽性的F1代雜合子鼠；
3、選擇來自同一只F0代鼠，基因型一致的F1代鼠，達到性成熟后進行互配，可獲得F2代鼠。對獲得的F2代鼠進行PCR及測序鑒定，理論上，F(xiàn)2代鼠中25%為純合子， 50%為雜合子，25%為野生鼠。
片段基因敲除鼠的建系原則與流程
1、通過針對靶基因不同位點設(shè)計、構(gòu)建相應(yīng)的一對gRNA質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)錄為RNA后，與Cas9 mRNA一起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代雜合子鼠；
2、F0代雜合子鼠與野生型鼠進行交配，獲得PCR鑒定陽性的F1代雜合子鼠；
3、選擇來自同一只F0代鼠，基因型一致的F1代鼠，達到性成熟后互配，可獲得F2代鼠。對獲得的F2代鼠進行PCR及測序鑒定，理論上，F(xiàn)2代鼠中25%為純合子，50%為雜合子，25%為野生鼠。
雙（多）基因敲除鼠的建系原則與流程
1、通過針對兩個靶基因分別設(shè)計、構(gòu)建相應(yīng)的gRNA質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)錄為RNA后，與Cas9 mRNA一起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代多基因雜合子鼠；
2、F0代雜合子鼠與野生型鼠進行交配，獲得PCR和測序鑒定陽性的F1代雙基因雜合子鼠；
3、選擇雙基因雜合子鼠進行雜交，獲得F2代鼠。對獲得的F2代鼠進行PCR及測序鑒定。
威斯騰實驗服務(wù)流程
威斯騰生物服務(wù)項目
| 分子生物學(xué)檢測 | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot 實驗服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標(biāo)檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經(jīng)元細胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內(nèi)皮組細胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關(guān)服務(wù) | 動物整體實驗服務(wù) | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學(xué)檢測 | 高通量測序 | 代謝組學(xué) |
| 細胞原代培養(yǎng) | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學(xué)相關(guān)實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學(xué)實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學(xué)整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
|
| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） |
|
|
| 行為學(xué)檢測 | 藥物篩選服務(wù)項目 | 藥效學(xué)評價 |
| 曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價 |
| 重復(fù)性刻板行為檢測 | 細胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 動物跑臺檢測 | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺 | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價 | |
| 常規(guī)藥物體外篩選 |
【本平臺合作項目】
分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
【全國免費熱線】400-675-6758
【電話】 023-65316016,023-65316556
【郵箱】 china-western@163.com
【官網(wǎng)網(wǎng)址】m.veisda.com
【地址】 重慶市高新區(qū)二郎創(chuàng)業(yè)大道高科創(chuàng)業(yè)園D棟2樓
科研服務(wù)高品質(zhì)供應(yīng)商
全國免費熱線：400-675-6758
公司總部：重慶高新區(qū)生物醫(yī)藥研發(fā)產(chǎn)業(yè)園
電 話：023-65316016/65316556
網(wǎng) 址：m.veisda.com
渝備案號：渝ICP備16009673號
QQ交談
