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(a) MTT：

MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料?；罴?xì)胞在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素c的作用下四唑環(huán)開(kāi)裂，生成藍(lán)色的甲月替結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，甲月替結(jié)晶的生成量?jī)H僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比（死細(xì)胞中的琥珀酸脫氫酶消失，不能還原MTT）。還原生成的甲月替結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸鈉（PH 4.7）或10%酸化十二甲基磺酸鈉（PH 4.7）的溶液中溶解。利用酶標(biāo)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)處的光密度測(cè)出OD值，即反映活細(xì)胞數(shù)目。也可利用DMSO（二甲基亞砜）來(lái)溶解。用DMSO之前要盡量去掉培養(yǎng)液，一遍DMSO溶解甲月替顆粒，進(jìn)行比色測(cè)定。

(b) CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖（活力）：

CCK-8（cell-counting kit-8）檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用WST-8取代MTT被還原，WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。且WST-8相較XTT和MTS化學(xué)性狀更穩(wěn)定， 因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果相對(duì)更加穩(wěn)定。此外，WST-8相較MTT、XTT，線性范圍相對(duì)寬，靈敏度更高。

當(dāng)細(xì)胞增殖得越多越快，則formazan產(chǎn)生量越多，顏色越深；反之，當(dāng)內(nèi)外因造成的細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。應(yīng)用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算便可以獲得細(xì)胞增殖（活性）相關(guān)數(shù)據(jù)。

(c) XTT：

化學(xué)名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其所產(chǎn)生的水溶性的產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解還原產(chǎn)物結(jié)晶的步驟，XTT可以被活細(xì)胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產(chǎn)物（formazan）。代謝產(chǎn)物在OD450處有吸收峰。

1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞；2、檢測(cè)快速；3、靈敏度高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT。 缺點(diǎn)：XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。

應(yīng)用范圍

應(yīng)用案例

用cck8的方法檢測(cè)PDGF-D對(duì)細(xì)胞的毒性，本實(shí)驗(yàn)采用2個(gè)藥物濃度，分別作用于細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)，然后通過(guò)CCK8檢測(cè)增殖情況，從而反映其藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。從表1以及柱狀圖中了解到藥物濃度越大作用細(xì)胞時(shí)間越長(zhǎng)，其細(xì)胞的增殖率越大，即藥物對(duì)細(xì)胞的毒性越小。