科研服務(wù) 時間：2020-07-22 17:13:00 瀏覽：54078次
一、Masson染色基本原理
Masson染色時膠原纖維呈藍色(被苯胺藍所染)，肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染),這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關(guān)。不同的組織和細胞成分,它們的孔隙大小是不同的?？紫兜拇笮?決定了組織的滲透性。如孔隙小,組織結(jié)構(gòu)致密,滲透性低；孔隙寬,組織結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高。如已固定的組織用一系列陰離子水溶性染料先后或混合染色,則可發(fā)現(xiàn)紅細胞被最小分子的陰離子染料著染.肌纖維與胞質(zhì)被中等大小的陰離子染料著染,而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說明了紅細胞對陰離子染料的滲透性最小,肌纖維與胞質(zhì)次之,而膠原纖維具有最大的滲透性。根據(jù)組織不同的滲透性能,選擇分子大小不同的陰離子染料進行染色,便可把不同組織成分顯示出來.而染料分子的大小,主要由其分子量來體現(xiàn)。小分子量者易于穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織,而大分子最者則只能進入結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高的組織。一般來說,結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高的組織多選擇大分子染料,而結(jié)構(gòu)致密,滲透性低的組織多選擇小分子染料。
三、實驗主要試劑
Regaud 氏蘇木精：蘇木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸餾水80ml。
將蘇木精加入蒸餾水內(nèi)加溫溶解,冷卻后加入酒精和甘油,放數(shù)日后即可應(yīng)用。
Masson麗春紅酸性復紅液： 麗春紅0.7g，酸性復紅0.3g，蒸餾水99ml，冰醋酸1ml。
0.2%冰醋酸水溶液： 冰醋酸0.2 ml，蒸餾水100 ml。
1%磷鉬酸水溶液：磷鉬酸1g，蒸餾水100 ml。
苯胺藍水溶液：苯胺藍2g，蒸餾水98 ml，冰醋酸2 ml。
1%光綠水溶液：光綠 1g，蒸餾水100 ml。
三、實驗步驟
1． 石蠟切片脫蠟至水。
2． 鉻化處理或去汞鹽沉淀（甲醛固定的組織此步可略）。
3． 依次自來水和蒸餾水洗。
4． 用Regaud蘇木精染液或Weigert蘇木精液染核5-10min。
5． 充分水洗,如過染可鹽酸酒精分化。
6． 蒸餾水洗。
7． 用Masson 麗春紅酸性復紅液5-10min。
8． 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
9． 1%磷鉬酸水溶液分化3-5min。
10. 不經(jīng)水洗,直接用苯胺藍或光綠液染5min。
11．以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12．95%酒精、無水酒精、二甲苯透明、中性樹膠封固。
四、注意事項：
1．控制好染色步驟。
2．組織固定起著很重要的作用，根據(jù)不同的固定液可延長或縮短染色時間。
3．0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色調(diào)清晰鮮艷。
4．磷鉬酸水溶液對麗春紅、酸性復紅有分化作用，分化時鏡下控制， 肌纖維和纖維素呈紅色，膠原纖維呈淡粉紅色即可。
五、結(jié)果提供 膠原纖維、粘液、軟骨呈藍色（如光綠液染色為綠色），胞漿、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈紅色，胞核黑藍色。
1、完整的實驗報告（包含試劑、耗材、操作步驟、病理結(jié)果）；
2、原始病理照片，一般提供100倍、400倍照片各2張；
3、如果客戶提供的是組織，我們提供包埋、染色片
六、樣本要求
取材保持組織新鮮（組織塊以小于2cm*1.5cm*0.3cm為宜），立即放入固定液（固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液，體積為組織塊的10倍以上）中，避免干燥；對于有血跡的樣本，可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中
七、服務(wù)流程
威斯騰生物服務(wù)項目
| 分子生物學檢測 | 蛋白質(zhì)與免疫學 | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot 實驗服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝純化 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| 生長因子芯片 | 脂肪干細胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 信號通路磷酸化水平檢測芯片 | 心肌成纖維細胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 生長因子芯片 | 血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 炎癥因子芯片 | 神經(jīng)元細胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 內(nèi)皮組細胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因編輯動物 | |
| 趨化因子芯片 | 電生理相關(guān)服務(wù) | 動物整體實驗服務(wù) |
| HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 膜片鉗實驗 | |
| 細胞生物學 | 高通量測序 | 代謝組學 |
| 細胞原代培養(yǎng) | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關(guān)實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理學檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 |
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| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） |
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| 行為學檢測 | 藥物篩選服務(wù)項目 | 藥效學評價 |
| 水迷宮實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 神經(jīng)系統(tǒng)藥物藥效學評價 |
| 曠場實驗 | 細胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學評價 |
| 重復性刻板行為檢測 | 蛋白質(zhì)組學靶標研發(fā)平臺 | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學評價 |
| 動物跑臺檢測 | 分子藥理研究平臺 | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學評價 |
| 強迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學評價 |
| 常規(guī)藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學評價 |
【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、病理染色檢測、細胞敲除&敲入、模式與轉(zhuǎn)基因動物、SPF動物保種、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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