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一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇SPF 級(jí)SD大鼠，6~8w齡，體重250-280 g，雄性。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1、動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)

動(dòng)物保持12h-12h晝夜交替，自由飲水、進(jìn)食，溫度23-25℃，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。

2、SD大鼠MCAO模型構(gòu)建

參照Longa線栓法阻塞大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈（MCA），建立急性局部腦缺血再灌注模型。具體步驟為：大鼠稱重，7%水合氯醛（0.5ml/100g）腹腔注射麻醉，頸前部備皮、消毒，然后將大鼠仰臥位放置于操作臺(tái)上，鈍性分離右側(cè)皮下組織及肌肉暴露出頸總動(dòng)脈，眼科鑷小心分離伴行于頸總動(dòng)脈的迷走神經(jīng)及動(dòng)脈周圍粘膜組織。繼續(xù)向頭部分離，小心剔除覆蓋于動(dòng)脈上方的粘膜組織，可見頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈與頸總動(dòng)脈呈“Y”字形分布，游離出獨(dú)立的頸內(nèi)、外動(dòng)脈。頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎（用燒燙的鑷子熔斷遠(yuǎn)心端便于插入栓線），近心端埋線以備結(jié)扎拴線，再用微動(dòng)脈夾夾閉頸總動(dòng)脈近心端和頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，用顯微外科剪將頸外動(dòng)脈剪一小口，將栓線由頸外動(dòng)脈切口處插入頸內(nèi)動(dòng)脈，用預(yù)先埋線結(jié)扎頸外動(dòng)脈防止出血，松開微動(dòng)脈夾，將栓線送入顱內(nèi)，有明顯的阻力感，表明栓線已插入MCA，局部腦缺血模型即告成功。醫(yī)用棉簽清理頸部血塊，縫合皮膚，酒精棉球消毒，將大鼠放回籠子。

插線成功即為腦缺血開始，將栓線輕柔退致頸外動(dòng)脈處，即為再灌注開始。術(shù)后動(dòng)態(tài)觀察大鼠的反應(yīng)。麻醉后保溫致動(dòng)物蘇醒，肛溫36.5±0.5℃。

3、腦室給藥

實(shí)驗(yàn)鼠頭部備皮后固定于腦立體定位儀，頭頂皮膚消毒，沿中線切開頭皮，剝離筋膜，標(biāo)記前囟，穿刺點(diǎn)位于矢狀縫右旁1mm，冠狀縫后1.5mm，進(jìn)針深度1.5mm。高速顱骨鉆于右側(cè)腦室注射部位正上方鉆穿顱骨，插入微量注射器，緩慢注入藥液，注射完畢后留針數(shù)分鐘，緩慢移出注射器，涂抹骨蠟，縫合外皮，完成腦定位注射。

4、建模后神經(jīng)功能缺損評(píng)分以及TTC染色檢測(cè)腦梗死灶分布

參照Zea Longa 5級(jí)神經(jīng)功能缺損評(píng)分法對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。0分：無神經(jīng)功能缺損；1分：輕度局灶神經(jīng)功能缺陷（不能完全伸展缺血對(duì)側(cè)前肢）；2分：中度局灶神經(jīng)功能缺陷（向缺血對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈）；3分：重度局灶神經(jīng)功能缺陷（向缺血對(duì)側(cè)傾倒）；4分：不能自發(fā)行走，昏睡。

第一次評(píng)分：篩選神經(jīng)功能評(píng)分在1-3分的大鼠納入實(shí)驗(yàn)對(duì)象，剔除神經(jīng)功能評(píng)分為0分和4分的大鼠。

第二次評(píng)分：于取材前進(jìn)行評(píng)分記錄各組間大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的差異。

5、WB 法檢測(cè)相關(guān)蛋白指標(biāo)表達(dá)

根據(jù)如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，與正常對(duì)照相比，A蛋白在模型組中表達(dá)增加，經(jīng)過藥物干預(yù)后表達(dá)降低。