時間:2020-08-05 10:38:00 瀏覽:11310次
【實驗方案】
一、研究對象:H9C2細胞株
二、研究藥物:1種測試藥
三、H9C2心肌細胞缺氧/復氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型的構建
遵守快融的原則。先將水浴鍋調至37℃,從液氮罐里拿出凍存管迅速投入37℃溫水中,并輕輕搖動使其內容物迅速融化(最好在1 min以內),取出凍存管,微微上下晃動凍存管,用75%酒精消毒后開啟,用吸管吸出溶解后的細胞懸液,注入離心管并加入5mL的含10%胎牛血清(FBS)的細胞培養(yǎng)液。以1000rpm離心5min,除去上清液,加入1 mL培養(yǎng)液吹打,使其形成懸浮液。用含20%FBS的細胞培養(yǎng)液適當稀釋后,接種到培養(yǎng)瓶,置于37℃、飽和濕度、5%CO2孵箱中培養(yǎng),24h后更換一次培養(yǎng)液,隨后視細胞生長情況及培養(yǎng)液顏色(一般待培養(yǎng)液變黃)更換培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。于 5% CO2加95 %N2孵箱中培養(yǎng)4h以模擬缺血環(huán)境,而后將細胞置于含 10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)24h,模擬再灌注環(huán)境。
四、藥物****對缺氧/復氧心肌細胞模型的生物學功能的影響與機制研究
(一)CCK-8檢測藥物處理對心肌細胞缺氧/復氧的影響
(二)QPCR檢測Y基因的表達水平。
(二)Western Blot檢測x蛋白的表達水平。
(四)流式細胞儀檢測各組細胞凋亡水平。
【結果展示】
1、CCK-8檢測藥物處理對心肌細胞缺氧/復氧的影響
2、藥物****對缺氧/復氧心肌細胞模型的生物學功能的影響與機制研究

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