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【實驗方案】

一、研究對象：H9C2細胞株

二、研究藥物：1種測試藥

三、H9C2心肌細胞缺氧／復氧(hypoxia／reoxygenation，H/R)模型的構建

遵守快融的原則。先將水浴鍋調至37℃，從液氮罐里拿出凍存管迅速投入37℃溫水中，并輕輕搖動使其內容物迅速融化（最好在1 min以內），取出凍存管，微微上下晃動凍存管，用75%酒精消毒后開啟，用吸管吸出溶解后的細胞懸液，注入離心管并加入5mL的含10%胎牛血清（FBS）的細胞培養(yǎng)液。以1000rpm離心5min，除去上清液，加入1 mL培養(yǎng)液吹打，使其形成懸浮液。用含20%FBS的細胞培養(yǎng)液適當稀釋后，接種到培養(yǎng)瓶，置于37℃、飽和濕度、5%CO2孵箱中培養(yǎng)，24h后更換一次培養(yǎng)液，隨后視細胞生長情況及培養(yǎng)液顏色（一般待培養(yǎng)液變黃）更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。于 5% CO2加95 %N2孵箱中培養(yǎng)4h以模擬缺血環(huán)境，而后將細胞置于含 10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)24h，模擬再灌注環(huán)境。

四、藥物****對缺氧/復氧心肌細胞模型的生物學功能的影響與機制研究

（一）CCK-8檢測藥物處理對心肌細胞缺氧/復氧的影響

（二）QPCR檢測Y基因的表達水平。

（二）Western Blot檢測x蛋白的表達水平。

（四）流式細胞儀檢測各組細胞凋亡水平。

【結果展示】

1、CCK-8檢測藥物處理對心肌細胞缺氧/復氧的影響

2、藥物****對缺氧/復氧心肌細胞模型的生物學功能的影響與機制研究